El kit (K1300) HIGHWAY contiene:
- 1 vial con 100 mg de Proteinasa K liofilizada (E1402)
- 5 viales con 1 ml cada uno de Buffer Proteinasa K (B0221)
La Proteinasa K recombinante (producida en Pichia Pastoris) (E1402) proveniente del hongo Titirachium album es una serin proteasa con amplia especificidad de sustrato, incluso en presencia de detergentes.
Contiene una actividad específica de 40 U/mg proteína. Se define 1 U de enzima como la actividad generada por péptidos y aminoácidos Folin-positivos equivalentes a 1 µmol de tirosina por minuto a pH 7.5 a 37⁰C.
La concentración de trabajo recomendada es de 50-100 µg/ml para digestión proteica e inactivación enzimática y de 2 mg/ml para tratamiento de tejidos. Se recomienda preparar una solución stock de 20 mg/ml con el Buffer Proteinasa K (B0221) especialmente formulado por INBIO HIGHWAY.
Su actividad óptima se encuentra en los 50-55°C. Es estable en un amplio rango de pH: 4.0-12.5, siendo óptimo dentro de pH: 7.0 a 8.0
La inactivación enzimática se produce por calentamiento a 95°C por 10 minutos.
Actividad DNasa: no se detecta actividad con ADN lambda luego de 6 hs de incubación a 37ºC.
Actividad RNasa: no se detecta actividad ribonucleásica luego de 16 hs de incubación a 25ºC.
- 1 vial con 200 mg de Lisozima liofilizada HIGHWAY (E1405)
La Lisozima purificada a partir de clara de huevo de gallina, se emplea para hidrolizar el peptidoglicano de la pared celular de bacterias, siendo las bacterias Gram positivas más susceptibles que las bacterias Gram negativas.
Contiene una actividad específica de aprox. 50.000 U/mg proteína. Se define 1 U a la cantidad de enzima que produce la disminución de la absorbancia a 450 nm en 0,001 por minuto a pH 6,24 a 25⁰C (Micrococcus lysodeikticus, como sustrato).
La enzima es activa en un amplio rango de pH (6.0 a 9.0).
Se recomienda preparar una solución de 10 mg/ml en 10 mM Tris-HCl pH: 8,0 o en agua bidestilada estéril.
-1 vial con 100 mg de RNAsa A liofilizada HIGHWAY (E1407)
La RNAsa A proveniente de páncreas bovinos, es una endoribonucleasa que específicamente degrada ARN de simple cadena en residuos C y U.
Su actividad específica es mayor a 2500U/mg proteína. Se define 1 U a la cantidad de enzima que produce un aumento de la absorbancia de 1.0 a 260 nm cuando ARN de levadura es hidrolizado a 37⁰C, pH: 5,0.
La enzima permanece activa en un amplio rango de condiciones de reacción. A baja concentración de sal (0-100mM NaCl), la RNAsa A cliva ARN de simple y doble cadena, así como también híbridos ARN-ADN. Sin embargo a concentraciones de NaCl 0,3 M o mayores, la enzima específicamente cliva ARN de simple cadena.
La concentración de trabajo de la RNAsa A es 1-100 µg/ml dependiendo de la aplicación. Se inactiva a 95⁰C por 10 min.
Esta RNAsa A se encuentra libre de actividad de DNAsa. No es necesario calentar antes de utilizar.
- 1 vial con 1000 U de Inhibidor de RNasa (40U/µl) (R0020)
El Inhibidor de RNasa Highway reduce la actividad de RNasas provenientes de una gran variedad de organismos, protegiendo el ARN en diferentes condiciones de reacción.
Origen: bacterias E. coli recombinantes que codifican un gen inhibidor de ribonucleasas. Peso molecular: 49,9 kDa.
Aplicación: inhibición de la degradación del ARN en los siguientes procesos:
Transcripción in vitro, transcripción reversa in vitro, traducción in vitro, purificación de fracciones de células de mamíferos que contienen complejos de proteínas ARNm.
Storage buffer: 20 mM HEPES-NaOH (pH 7.5); 50 mM NaCl; 8 mM DTT; 0.5 mM ELUGENT y 50% (v/v) de glicerol.
Definición de actividad: una unidad de actividad es definida como la cantidad de inhibidor de RNasa que es necesaria para inhibir la actividad de 5 ng de RNasa en un 50%.
Inhibición e inactivación: desnaturalizantes comunes como SDS, urea y reactivos oxidantes inhiben fuertemente el inhibidor de RNasa. Inactivación total por calor a 75⁰C durante 10 min.
Protocolo: se sugiere el empleo de 20 a 40 U (0.5 a 1.0 µl) para una reacción de transcripción reversa de 20 µl finales.
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El kit (K1212) HIGHWAY contiene:
- 1 vial con 1.000 U (1U/µl) de DNasa I, RNasa free (E1408)
- 1 vial con 1,2 ml de Buffer de Reacción 10X (B0600)
- 1 vial con 1,2 ml de Solución Stop 10X (B0601)
La DNAsa I (RNasa free) es una endonucleasa recombinante que digiere el ADN de manera no específica y libera dinucleótidos, trinucleótidos y oligonucleótidos con extremos 5´fosforilados y 3´hidroxilados. La DNasa I digiere hebras de ADN simple y doble, cromatina e híbridos ARN-ADN. La enzima proviene de un clon recombinante de Pichia pastoris.
PM 29 kDa
Aplicación: degradación de templado de ADN post transcripción in vitro, purificación de ARN, DNasa I footprinting, nick translation, producción de fragmentos de longitud aleatoria de ADN.
Definición de actividad: 1 unidad de enzima degrada completamente 1 µg de ADN plasmídico (pUC19) en 10 minutos a 37⁰C en un buffer conteniendo 50 mM de Tris-HCl (pH 7,8) 10 mM de MgSO4 , 1 mM CaCl2.
Control de calidad: digestión de ADN luego de transcripción in vitro, ausencia de actividad ribonucleásica.
Inhibidores: quelantes de metales bivalentes, metales de transición en concentración mM (ej: Zn2+, Co2+), SDS aún en concentraciones menores a 0,1%, agentes reductores como DTT y B-mercaptoetanol, y fuerza iónica mayor a 50-100 mM.
Ampliar detalles Añadir a presupuesto-1 frasco color caramelo con 100ml de ARN-PrepZOL HIGHWAY (R0010)
l ARN-PrepZOL (R0010) se emplea para la extracción de ARN total de células, bacterias y tejidos, se encuentra listo para usar. El ARN resultante se encuentra libre de ADN y proteínas. El mismo puede ser empleado en análisis de Real Time PCR, Northern Blot, hibridización de Dot Blot, selección de poly (A)+, clonado molecular, ensayo de protección de RNasa y traducción in vitro.
Durante la homogeneización de la muestra o la lisis, el ARN-PrepZOL mantiene la integridad del ARN. La adición de cloroformo luego de la centrifugación, separa la solución en una fase acuosa y otra fase orgánica. El ARN permanece exclusivamente en la fase acuosa y es recuperado mediante precipitación con isopropanol. Luego de remover la fase acuosa, el ADN y las proteínas de la muestra pueden ser recuperados mediante precipitaciones secuenciales. La precipitación con etanol, permite extraer ADN de la interfase y una precipitación adicional con isopropanol permite obtener las proteínas de la fase orgánica.
Empleando el ARN-PrepZOL, se puede partir tanto de una pequeña cantidad de tejido (50-100mg) o células (5x106) como de una mayor cantidad (tejidos ≥ a 1 g y células ≥ a 107) tanto de origen humano, animal, plantas o bacterias.
Mediante este método se pueden procesar varias muestras en paralelo y todo el proceso no demanda más de 1 hora.
PRECAUCIÓN: Este reactivo es tóxico en contacto con la piel. En caso de exposición lavar inmediatamente con agua y detergente.
-50 extracciones /purificaciones HIGHWAY (K1205-50)
-250 extracciones/purificaciones HIGHWAY (K1205-250)
Se provee minicolumnas con membrana de sílica, tubos colectores, buffers, proteasa y manual de instrucciones.
El ADN PuriPrep-S kit permite la extracción y purificación rápida y sencilla de ADN total (genómico, mitocondrial) a partir de muestras de sangre entera, médula ósea, linfocitos, plasma, suero, células en cultivo, hisopado bucal, sangre de cordón. Es compatible con el uso de agentes anticoagulantes como heparina, citrato de sodio y EDTA.
Se obtiene un ADN puro, libre de proteínas, adecuado para su empleo en PCR, Southern blotting, análisis de restricción. El producto final, eluído de una mini columna, se puede aplicar directamente a PCR o ser conservado a -20ºC. Debido al escaso manipuleo, predominan fragmentos de entre 20-30 kpb, aunque llegan a sobrepasar 50 kpb.
Todo el proceso demanda no más de 30-35 minutos y no requiere el empleo de solventes orgánicos ni fenol.
-50 extracciones/purificaciones HIGHWAY (K1208-50)
-250 extracciones/purificaciones HIGHWAY (K1208-250)
Se provee minicolumnas con membrana de sílica, tubos colectores, buffers, proteinasa K y manual de instrucciones
El ADN PuriPrep-T kit permite la extracción y purificación rápida y sencilla de ADN total (genómico y mitocondrial) a partir de muestras de tejidos sólidos (biopsias, hígado, bazo, riñón, cola de ratón, tejidos fijados, hueso disgregado, bulbo capilar).
Se obtiene un ADN puro, libre de proteínas, que coeluye de una minicolumna de sílica con RNA, el cual podrá digerirse con RNasa A en caso que así se desee. El producto final puede aplicarse inmediatamente a una PCR o ser conservado a -20ºC.
Predominan fragmentos de 20-30 kpb y aún mayores, debido al escaso manipuleo.
Luego de la digestión del tejido con Proteinasa K (provista), el proceso demanda no más de 30-35 minutos y no requiere el empleo de solventes orgánicos ni fenol.
-50 extracciones/purificaciones HIGHWAY (K1209-50)
Se provee minicolumnas con membrana de sílica, tubos colectores, buffers, proteinasa K y manual de instrucciones.
El ADN Puriprep B-kit permite la extracción y purificación rápida y sencilla de ADN genómico a partir de bacterias.
Se obtiene un ADN puro, libre de proteínas, que coeluye de una minicolumna de sílica con ARN, el cual podrá digerirse con RNAsaA en caso que así se desee.
El producto final puede aplicarse inmediatamente a una PCR o ser conservado a -20⁰C.
Luego de la lisis bacteriana con proteinasa K y lisozima (en el caso de Gram positivas) el proceso demanda no más de 30-35 minutos y no requiere el empleo de solventes orgánicos ni fenol.
- 20 extracciones /purificaciones HIGHWAY (K1206-20)
-100 extracciones/purificaciones HIGHWAY (K1206-100)
Se provee minicolumnas con membrana de sílica, tubos colectores, buffers y manual de instrucciones.
El ADN PuriPrep-GP kit permite la extracción y purificación rápida y sencilla de fragmentos de ADN a partir de productos de amplificación por PCR en solución o a partir de geles de agarosa común o de bajo punto de fusión.
Los fragmentos entre 100pb y 10.000pb se separan con una eficiencia entre 60 y 90%, siendo mayor para productos de PCR en solución respecto a los purificados a partir de gel. El kit también permite concentrar una solución diluida de ADN o cambiar el buffer en que está disuelto.
Se obtiene un ADN puro, eluído de una mini columna con membrana de sílica, apto para aplicaciones como secuenciación por métodos radioactivos o de fluorescencia, amplificación por PCR, digestión con enzimas de restricción, hibridización, marcación, ligación.
Todo el proceso demanda no más de 30-35 minutos, dependiendo del número de muestras, y no requiere el empleo de solventes orgánicos ni fenol.
-20 extracciones /purificaciones HIGHWAY (K1207-20)
-100 extracciones/purificaciones HIGHWAY (K1207-100)
Se provee minicolumnas con membrana de sílica, tubos colectores, buffers, RNasa y manual de instrucciones.
El ADN Puriprep P-kit permite la extracción y purificación rápida y sencilla de ADN plasmídico a partir de cultivos bacterianos (miniprep).
Se obtiene un ADN puro, libre de proteínas y ARN, adecuado para su empleo en PCR, secuenciación, análisis de restricción, ligación.
El producto final, eluído de una mini columna, se puede utilizar inmediatamente o ser conservado a -20ºC. Todo el proceso demanda no más de 30-35 minutos y no requiere el empleo de solventes orgánicos ni fenol. Se obtiene entre 1 y 20 ug de ADN, dependiendo del volumen de cultivo procesado y el número de copia del plásmido.
- 50 extracciones/purificaciones HIGHWAY (K1210-50)
- 250 extracciones/purificaciones HIGHWAY (K1210-250)
Se provee minicolumnas con membrana de silica, tubos colectores, buffers, perlas y manual de instrucciones.
El ADN Puriprep SUELO-kit permite la extracción y purificación rápida y sencilla de ADN de comunidades de microorganismos, a partir de muestras de suelo. Representa un buen complemento para llevar adelante estudios de metagenómica.
Durante el proceso se logra una eficiente eliminación de los inhibidores de la PCR contenidos en el suelo, como son los ácidos humicos, sin necesidad de emplear equipamiento sofisticado. El ADN eluído puede aplicarse directamente a una PCR o ser conservado a -20⁰C. El proceso demanda no más de 35-40 minutos y no requiere el empleo de solventes orgánicos, ni fenol.
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